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南京大學蔣錫群教授團隊 AM: 用于癌癥早期檢測的酸和乏氧串聯響應的深近紅外納米探針
2023-06-26  來源:高分子科技

  由于缺乏足夠的靈敏度和分辨率以及可靠的生物標志物,目前大約50%的癌癥只有在晚期才被發現;目前臨床可用的診斷成像方式,如計算機斷層掃描(CT),磁共振成像(MRI)和正電子發射斷層掃描(PET)等,其極限成像尺寸約為1毫米,而1毫米的微小病變就已經含有約105-106個腫瘤細胞。當腫瘤發生轉移或者復發時,其惡性病變往往是極小的,目前臨床的檢測技術難以實現精準的檢測。所以在早期準確地發現微小的惡性病變仍然是癌癥診斷和治療的一大挑戰。


  近期,南京大學蔣錫群教授團隊報道了一種可被酸性和乏氧循序激活的超靈敏磷光納米探針Ir-D,用于癌癥的早期檢測。該納米探針以對氧氣敏感的具有深近紅外發射磷光銥配合物為核,通過酸敏感鍵連接水溶性高分子聚乙二醇為殼。聚乙二醇外殼不僅在循環過程中為納米探針提供了穩定性和隱身功能,而且還可以作為酸性觸發開關打開深近紅外信號。利用對腫瘤微環境的酸性和乏氧的兩步響應信號放大,結合深度近紅外區的信號檢測,該探針能夠檢測小鼠體內數百個腫瘤細胞或微米級的小原位腫瘤和轉移灶。
 

1. Ir-D在不同pHpO2條件下的形貌和光學性質表征。


  作者首先研究了溶液中探針的酸觸發的形貌的變化以及兩步串聯響應對于磷光信號的提升。結果顯示在酸性條件下(如pH 5.8),隨著時間的推移,納米探針的形貌發生明顯改變,由于酸敏感亞胺鍵的斷裂,其聚乙二醇外殼會逐漸脫除,銥配合物疏水核會暴露出來并且發生聚集。從光譜表征來看,探針在703 nm處有最強的磷光發射峰,探針的信號在酸響應后的生理性溶液中發生約6倍的增強;與常氧條件下(21% O2)比,其酸響應后的溶液在乏氧狀態下(0% O2)的信號增強了7倍。同時研究者還發現,合成的納米探針在765 nm處具有一個肩峰,在深近紅外(>800 nm)區域也具有明顯的磷光發射,并且能夠對酸和乏氧響應,該探針能夠提供從近紅外到深近紅外的寬泛的成像窗口。 


2酸敏感納米探針的細胞響應性成像和活體腫瘤特異性成像。


  隨后,如圖2,作者研究了腫瘤細胞對探針的攝取以及探針在腫瘤細胞內的響應情況。結果顯示,在pH 7.4時,將氧濃度從21%改變為1%,細胞中Ir-D探針信號顯著增加1%氧濃度時,降低pH進一步增加磷光信號Ir-D納米探針具有pH特異性以及乏氧響應特性。進一步地,作者構建了多種類型的小鼠腫瘤模型驗證了兩步串聯響應的探針對于腫瘤檢測的特異性,Ir-D探針在多種皮下瘤、轉移瘤以及PDX腫瘤模型中都能實現高靈敏度的成像。 


3. Ir-D納米探針對體內癌細胞、小腫瘤以及微小轉移結節的檢測。


  作者通過皮下植入一定數量的H22癌細胞模型,進一步評估Ir-D成像靈敏度。在小鼠背部植入不同數量的活H22細胞后,靜脈注射Ir-D在預定時間點對小鼠進行成像。可以觀察到,與注射PBS的小鼠相比,注射Ir-D的小鼠細胞在h時在該區域有明顯的磷光信號。并且僅注射數百個癌細胞的小鼠的信號強度比PBS組平均高約2.0倍。此外,注射后8 h注射細胞區信號強度與注射細胞數相關。為了進一步評價Ir-D在檢測早期腫瘤病變中的靈敏度作者通過腫瘤細胞類器官原位植入到小鼠乳腺中構建了早期腫瘤的動物模型。并在模型建立成功后,Ir-D靜脈注射到小鼠體內對動物進行成像。結果顯示,植入微小腫瘤的乳腺部位具有明顯的磷光成像信號。組織切片H&E染色證實癌細胞類器官位于乳腺內,大小為260×290 μm。冷凍切片的CLSM圖像顯示,植入類器官的區域有明顯的探針信號。


  此外,作者還構建了乳腺癌的肺轉移模型來檢驗Ir-D探針的對于體內微小轉移灶的檢測能力。靜脈注射Ir-D 探針24 h后,全身成像可以觀察到小鼠肺部有明顯的Ir-D的磷光信號。離體肺成像顯示,注射Ir-D的磷光信號來源于肺轉移結節。在多組小鼠樣本中肉眼可分辨的結節只有2 ~ 8個,而Ir-D探針的磷光成像最多可檢出33個結節。進一步測量發現,Ir-D探針檢測到的肺轉移結節的大小最大2.1 mm,最小115 μm。所有轉移結節均通過H&E染色觀察得到進一步證實肺轉移的總體診斷準確率在90%以上 


4.體內外成像的對比度和穿透深度的提升研究


  最后,作者進一步評估Ir-D納米探針的信號穿透性,富集Ir-D探針后的腫瘤離體成像表明Ir-D的光信號可以穿透7-10 mm的組織深度,并且在深近紅外波段(800-850 nm850-900 nm)的信號在深度組織(7-1mm)成像時穿透性要明顯高于近紅外波段(700-750nm750-800nm)。作者在利用Ir-D對荷瘤小鼠不同波長發射區域進行全身成像時,觀察到隨著信號收集區域轉移到深近紅外區域,背景信號明顯減少同時,將信號收集波長增加到深近紅外區信噪比顯著升高。對乳腺癌肺轉移模型離體成像的結果進行分波段分析時發現,在650-900 nm檢測范圍內的肺轉移病灶成像顯示出最佳的對比度和分辨率這些結果表明,所報道的深近紅外探針通過將成像波長范圍擴大到深近紅外區域,可以顯著提高氧成像的對比度。


  這項研究工作充分發揮了深近紅外光學檢測靈敏度高、分辨率高等獨特優勢,闡明深近紅外區域成像信號對于微小腫瘤成像質量的提升,擴展了兩步串聯信號放大策略在癌癥早期檢測中應用,為癌癥早期檢測提供了新思路。該工作以“Acid and hypoxia tandem-activatable deep near-infrared nanoprobe for two-step signal amplification and early detection of cancer”為題發表在《Advanced Materialshttps://doi.org/10.1002/adma.202212231上。南京大學蔣錫群教授為論文通訊作者,博士生周森森論文為第一作者。工作得到了國家自然科學基金、國家重點研發計劃以及江蘇省自然科學基金的支持。


  論文鏈接:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adma.202212231

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(責任編輯:xu)
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