本發明公開了一種納米雜化絲素蛋白水凝膠及其制備方法和應用，屬于生物醫用材料技術領域。本發明所述的納米雜化絲素蛋白水凝膠由再生絲素蛋白水溶液與納米羥基磷灰石通過預共混，經超聲處理制備得到。本發明所述的納米雜化絲素蛋白水凝膠的制備方法通過改變超聲條件和兩種材料的混合比例，控制凝膠化時間，實現快速凝膠化，不僅避免了潛在有毒化學交聯劑的使用，而且可以很好的保持細胞或者生物因子的活力。本發明制備出的納米雜化絲素蛋白水凝膠具有可調控的凝膠性能和機械性能、良好的細胞相容性和骨誘導能力，不僅可以負載干細胞進行骨缺損修復，還有望用于包埋活性因子進行協同治療。