發明/申請人：姚菊明，沈凱，吳娟紅，吳羅杰，范科杰
專利號/申請號：200910096192.X
授權/申請日期：2009-12-9
本發明涉及材料制備技術領域，尤其涉及一種兩步法鹽析純化重組絲蛋白的方法。本發明的目的是提供工藝簡單、成本低、操作方便的一種兩步法鹽析純化重組絲蛋白的方法，包括下列步驟：（1）將含有目的基因表達質粒的大腸桿菌經發酵培養和IPTG誘導表達后，離心收集菌體，將其重懸于裂解緩沖液（pH 8.0，50 mmol/L NaH2PO4，300 mmol/L NaCl，10 mmol/L咪唑）中，冰浴并超聲波破碎后，離心（4℃，14500 rpm，10 min）收集上清，調節pH至6.0后，添加(NH4)2SO4至20％飽和度，并于37°C靜置2小時后離心（4℃，12000 rpm，20 min）收集上清液；（2）調節上清液的pH至6.0，添加(NH4)2SO4至40％飽和度，并于37°C靜置2小時后離心（4℃，12000 rpm，20 min）收集沉淀，經過真空干燥后得重組絲蛋白粉末。本發明的有益之處在于，每升培養基可以生產重組絲蛋白1 g左右，大大提高了重組蛋白的生產效率。