發(fā)光分子在稀溶液里可有效發(fā)光,但在濃溶液中或聚集狀下,發(fā)光能力減弱甚至完全消失。德國科學(xué)家60年前發(fā)現(xiàn)的這種聚集猝滅(ACQ)現(xiàn)象,讓發(fā)光領(lǐng)域的研究者大為撓頭。因?yàn)榘l(fā)光材料多在固態(tài)下使用。分子越多,發(fā)光能力反而越弱,怎么辦?那就避免讓他們聚集在一起,這是大多數(shù)科學(xué)家研究的方向:如何阻止分子聚集。然而唐本忠院士獨(dú)辟蹊徑,提出了聚集誘導(dǎo)發(fā)光(AggregateInduced Emission,AIE),它不同于熒光猝滅,分子越是聚集,越能發(fā)出耀眼的光芒,尤其在固態(tài)下發(fā)光效果更強(qiáng)(圖1)。這就為發(fā)光材料領(lǐng)域打開了一扇全新的大門。
圖1:ACQ與AIE的對比
AIETM線粒體紅色探針(AIETM Mitochondria Red)是基于聚集誘導(dǎo)發(fā)光(AIE)原理研發(fā)的一種熒光分子,能發(fā)射紅色熒光。紅光區(qū)的熒光分子具有更長的波長,可以減少生物樣品的光損害,有更少的自發(fā)熒光背景干擾,還具有更深的穿透力。這些特質(zhì)都使得AIETM Mitochondria Red有著更突出的應(yīng)用。從AIETM Mitochondria Red對Hela細(xì)胞進(jìn)行染色可以看到,AIE?線粒體紅色探針(AIETMMitochondria Red)可以高選擇性地對線粒體進(jìn)行染色,其染色區(qū)域與商用的線粒體染色劑Mito-GFP可以完全重合(圖2A)。
圖2A:AIE?Mitochondria Red選擇性染色線粒體
圖2B:AIE?Mitochondria Red超高的光穩(wěn)定性
“聚集誘導(dǎo)發(fā)光”的特性使得AIE? Mitochondria Red還具有很高的光穩(wěn)定性。圖2B顯示,AIETM Mitochondria Red的光強(qiáng)度在激發(fā)光掃描40回之后依舊不減,然而商用的MitoTracker Red (MT)在同樣波長的激發(fā)光掃描下,8回之后熒光信號就已經(jīng)難以捕捉。
線粒體是細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸的主要場所,能夠維持細(xì)胞的正常功能,它在呼吸氧化過程中,所產(chǎn)生的能量以電化學(xué)勢的形式儲存于線粒體的內(nèi)膜,形成線粒體內(nèi)膜電位(Mitochondrial Membrane Potential, MMP),研究發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞在不同因子作用下發(fā)生凋亡時均伴有MMP的下降,并且線粒體膜電位的下降被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡過程中最早發(fā)生的事情。另一方面,在瘋狂增殖的癌細(xì)胞中,為其提供能量的線粒體數(shù)量明顯增多,線粒體的活性(體現(xiàn)為膜電位高低)亦明顯增強(qiáng)。AIETM Mitochondria Red對線粒體膜電位具有很高的靈敏度,可以通過熒光信號的強(qiáng)弱反映膜電位的變化。圖3清晰地顯示在通過oligomycin和CCCP處理過細(xì)胞之后(增高和降低線粒體膜電位的一般方法),熒光強(qiáng)度隨著膜電位的增高和降低也相應(yīng)地增強(qiáng)和減弱。
圖3:熒光強(qiáng)度與膜電位的關(guān)系
由于線粒體膜電位與細(xì)胞活性有著緊密的關(guān)系,因此在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,AIETM Mitochondria Red探針對預(yù)測男性不育癥有著可觀的前景。小鼠精子細(xì)胞活性檢測的實(shí)驗(yàn)錄像(Movie)表明,明亮的紅色熒光來自精力充沛的精子,而活性低下的精子僅產(chǎn)生微弱的紅色熒光,甚至不產(chǎn)生熒光。這表明AIETM Mitochondria Red可以用于監(jiān)測精子活性。
總的來說,熒光探針產(chǎn)品AIETM Mitochondria Red對線粒體的高選擇性,對膜電位的高靈敏度以及超高的光穩(wěn)定性使之成為一個十分出色的線粒體染色劑以及細(xì)胞活性指示劑。
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